Indicatori Biologici di sterilizzazione

Indicatori di sterilizzazione - Indicatori biologici

Strip, dischi di carta

Le strip sono strisce di carta inoculate con spore di Geobacillus stearothermophilus, Bacillus atrophaues o Bacillus pumilus, usate per verificare in modo ottimale la sterilizzazione di carichi asciutti con vari agenti sterilizzanti, rispettivamente vapore, ossido di etilene/calore secco e radiazioni.

La strip è di solito racchiusa in una bustina di carta, che va posizionata all’interno del carico e sottoposta al ciclo di sterilizzazione, durante il quale l’agente sterilizzante entra in contatto con le spore. 

Al termine, la strip deve essere estratta dalla bustina e incubata per 7 giorni in Soybean Casein Digest Broth (TSB). L’eventuale intorbidimento del terreno indica la crescita batterica e quindi l’insuccesso della sterilizzazione. Sono disponibili brodi con indicatore di pH che, cambiando colore con la crescita batterica, permettono di validare un accorciamento importante del tempo di incubazione.

Per utilizzi particolari si possono utilizzare mini strip, dischi di carta e fili di cotone.

Indicatori biologici “self-contained” o autocontenenti (SCBI)

Una valida alternativa alle strip è data dagli indicatori biologici “self-contained”, in cui un dischetto di carta con le spore è posizionato all’interno di una piccola provetta di plastica con tappo forato, assieme a un’ampollina di vetro contenente un brodo di coltura con indicatore di viraggio.

I vantaggi degli SCBI sono due: il tempo di incubazione post sterilizzazione si accorcia a 48 o 24 ore (nel caso del vapore addirittura si arriva 10 ore) e non vi è alcuna manipolazione delle spore dato che la strip rimane all’interno della provetta di plastica, dove viene incubata. L’indicatore deve essere posizionato all’interno del carico e sottoposto al ciclo di sterilizzazione, durante il quale l’agente sterilizzante entra in contatto con le spore. Al termine, si schiaccia la provetta rompendo l’ampollina interna, che quindi rilascia il brodo inumidendo il dischetto. Si procede con l’incubazione e la verifica dell’eventuale viraggio di colore.

Dischi di acciaio e SCBI

Per la sterilizzazione con perossido di idrogeno si utilizzano abitualmente spore di Geobacillus stearothermophilus o Bacillus atrophaues inoculate su supporto di acciaio, sia nella versione classica (dischetto di acciaio in bustina) che in quella self-contained.

Sospensioni di spore

Spore sospese in soluzione acquosa per esigenze particolari, ad esempio la verifica della sterilizzazione di medical devices sottili o dalla struttura complessa.

Si procede inoculando un’aliquota della sospensione sul campione e lasciando asciugare. L’oggetto deve essere poi impacchettato come di consueto e sottoposto a sterilizzazione. Al termine, l’oggetto va incubato in brodo di coltura per verificare l’eventuale crescita batterica.

Occorre considerare che il D-value indicato sul certificato si riferisce ai test eseguiti sulla sospensione inoculata su strip di carta e che la resistenza potrebbe cambiare in modo evidente a seconda del tipo di supporto su cui la sospensione è inoculata. Infatti, le spore possono aderire alle superfici formando addensamenti in zone che a livello microscopico risultano porose o rugose. Questo aspetto è ancora più evidente se si intende inoculare la sospensione in un liquido, i cui effetti sulla resistenza della spora possono essere del tutto inattesi.

Brodi di coltura per indicatori biologici

Gli indicatori biologici trattati con la sterilizzazione devono essere incubati in Soybean Casein Digest Broth (TSB) alla temperatura e per il tempo specifici per il tipo di indicatore. Per confermare l'efficacia del processo di sterilizzazione non ci deve essere crescita batterica. Il normale TSB evidenzia la crescita con la comparsa di torbidità, ma esistono dei brodi modificati con substrato cromogenico che cambia colore con la crescita batterica e che permettono di rilevarla in tempi più rapidi.

L'incubazione degli indicatori può essere fatta in incubatori a secco per indicatori biologici o in incubatori per microbiologia.