Indicatori biologici sterilizzazione Vapore

Gli indicatori biologici sono costituiti da spore batteriche standardizzate inoculate su diversi tipi di supporto che, oltre a consentirne l’uso appropriato, emulano il processo che porta all’abbattimento della carica microbica.

Gli indicatori biologici per sterilizzazione con vapore si presentano come

Strip, dischetti, fili, stanghette: carrier inoculati con le spore
Dispositivi self-contained contenenti la strip inoculata con le spore e l'ampollina col brodo di coltura
Ampolle di vetro contenenti le spore sospese in brodo di coltura
Flaconcini di spore in sospensione acquosa

Microrganismi

Geobacillus stearothermophilus 7953
Bacillus subtilis 35021

Gli indicatori biologici per sterilizzazione con vapore sono regolati da

ISO 11138-1:2017 Sterilization of health care products — Biological indicators Part 1: General requirements
ISO 11138-3:2017 Sterilization of health care products — Biological indicators Part 3: Biological indicators for moist heat sterilization processes
ISO 11138-5:2017 Sterilization of health care products — Biological indicators Part 5: Biological indicators for low-temperature steam and formaldehyde sterilization processes
EP e USP

Focus: validità dei test genetici su Geobacillus sterothermophilus

Da qualche anno alcuni clienti hanno iniziato a fare test genetici sulle spore contenute negli indicatori biologici e questo ha fatto emergere la difficoltà ad ottenere risultati affidabili e univoci per quanto riguarda il Geobacillus stearothermophilus, che presenta una somiglianza genetica estrema con altre specie di Geobacillus, tra cui il G. thermolevorans e il G. kaustophilus, ma anche altri. Molte specie condividono regioni genetiche altamente conservate, in Geobacillus i marcatori genetici spesso non possiedono la variabilità necessaria per distinguere le specie al 100%.

Per avere una distinzione esatta è spesso necessario un approccio multiforme che combini analisi genetiche, biochimiche e fenotipiche e consenta così una differenziazione precisa delle specie di Geobacillus, ma si tratta di un approccio complesso e costoso.

Comunicazione Verifica Genetica Geobacillus stearothermophilus

Indicatori biologici Vapore Crosstex

Indicatori biologici Vapore Etigam

Indicatori biologici Vapore True Indicating

Strip, dischi di carta, fili

Le strip sono strisce di carta inoculate con spore di Geobacillus stearothermophilus usate per verificare in modo ottimale la sterilizzazione con vapore di carichi asciutti.

La strip è di solito racchiusa in una bustina di carta, che va posizionata all’interno del carico e sottoposta al ciclo di sterilizzazione, durante il quale il vapore entra in contatto con le spore.

Al termine, la strip deve essere estratta dalla bustina e incubata per 7 giorni in Soybean Casein Digest Broth (TSB). L’eventuale intorbidimento del terreno indica la crescita batterica e quindi l’insuccesso della sterilizzazione. Sono disponibili brodi con indicatore di pH che, cambiando colore con la crescita batterica, permettono di validare un accorciamento importante del tempo di incubazione.

Per utilizzi particolari si possono utilizzare mini strip, dischi di carta e fili di cotone.

Indicatori biologici “self-contained” o autocontenenti (SCBI)

Una valida alternativa alle strip è data dagli indicatori biologici “self-contained”, in cui un dischetto di carta con le spore è posizionato all’interno di una piccola provetta di plastica con tappo forato, assieme a un’ampollina di vetro contenente un brodo di coltura con indicatore di viraggio.

I vantaggi degli SCBI sono due: il tempo di incubazione post sterilizzazione si accorcia a 24 ore o 10 ore e non vi è alcuna manipolazione delle spore dato che la strip rimane all’interno della provetta di plastica, dove viene incubata. L’indicatore deve essere posizionato all’interno del carico e sottoposto al ciclo di sterilizzazione, durante il quale il vapore entra in contatto con le spore. Al termine, si schiaccia la provetta rompendo l’ampollina interna, che quindi rilascia il brodo inumidendo il dischetto. Si procede con l’incubazione e la verifica dell’eventuale viraggio di colore.

Ampolle di vetro

Le ampolline di vetro contengo le spore sospese in un brodo di coltura a viraggio di colore, quindi a rapida incubazione. Si utilizzano per verificare la sterilizzazione con vapore di carichi liquidi (es. terreni di coltura) ma anche asciutti (es. vetreria). Al termine della sterilizzazione l'ampollina va messa tal quale a incubare per verificare l'eventuale cambio di colore).

Sospensioni di spore

Spore sospese in soluzione acquosa per esigenze particolari, ad esempio la verifica della sterilizzazione di medical devices sottili o dalla struttura complessa.

Si procede inoculando un’aliquota della sospensione sul campione e lasciando asciugare. L’oggetto deve essere poi impacchettato come di consueto e sottoposto a sterilizzazione. Al termine, l’oggetto va incubato in brodo di coltura per verificare l’eventuale crescita batterica.

Occorre considerare che il D-value indicato sul certificato si riferisce ai test eseguiti sulla sospensione inoculata su strip di carta e che la resistenza potrebbe cambiare in modo evidente a seconda del tipo di supporto su cui la sospensione è inoculata. Infatti, le spore possono aderire alle superfici formando addensamenti in zone che a livello microscopico risultano porose o rugose. Questo aspetto è ancora più evidente se si intende inoculare la sospensione in un liquido, i cui effetti sulla resistenza della spora possono essere del tutto inattesi.