Indicatori biologici sterilizzazione Perossido di idrogeno

Gli indicatori biologici sono costituiti da spore batteriche standardizzate inoculate su diversi tipi di supporto che, oltre a consentirne l’uso appropriato, emulano il processo che porta all’abbattimento della carica microbica.

Gli indicatori biologici per sterilizzazione con perossido di idrogeno vaporizzato (vH2O2) si presentano come

Dischi di acciaio, barrette ecc inoculate con le spore
Dispositivi self-contained contenenti il dischetto con le spore e l'ampollina col brodo di coltura
Flaconcini di spore in sospensione acquosa

Microrganismi

Geobacillus stearothermophilus 7953
Geobacillus stearothermophilus 12980

Gli indicatori biologici per sterilizzazione con perossido di idrogeno sono regolati da

ISO 11138-1:2017 Sterilization of health care products — Biological indicators Part 1: General requirements

Focus: validità dei test genetici su Geobacillus sterothermophilus

Da qualche anno alcuni clienti hanno iniziato a fare test genetici sulle spore contenute negli indicatori biologici e questo ha fatto emergere la difficoltà ad ottenere risultati affidabili e univoci per quanto riguarda il Geobacillus stearothermophilus, che presenta una somiglianza genetica estrema con altre specie di Geobacillus, tra cui il G. thermolevorans e il G. kaustophilus, ma anche altri. Molte specie condividono regioni genetiche altamente conservate, in Geobacillus i marcatori genetici spesso non possiedono la variabilità necessaria per distinguere le specie al 100%.

Per avere una distinzione esatta è spesso necessario un approccio multiforme che combini analisi genetiche, biochimiche e fenotipiche e consenta così una differenziazione precisa delle specie di Geobacillus, ma si tratta di un approccio complesso e costoso.

Comunicazione Verifica Genetica Geobacillus stearothermophilus

Indicatori biologici APEX-Mesa

Indicatori biologici Perossido di idrogeno Crosstex

Indicatori biologici Perossido di idrogeno True Indicating

Dischi di acciaio, barrette

Sono supporti di acciaio inoculati con spore di Geobacillus stearothermophilus e usati per verificare in modo ottimale la sterilizzazione con perossido di idrogeno.

Il disco è di solito racchiuso in una bustina di carta, che va posizionata all’interno del carico e sottoposta al ciclo di sterilizzazione, durante il quale il perossido di idrogeno entra in contatto con le spore.

Al termine, il disco deve essere estratto dalla bustina e incubato per 7 giorni in Soybean Casein Digest Broth (TSB). L’eventuale intorbidimento del terreno indica la crescita batterica e quindi l’insuccesso della sterilizzazione. Sono disponibili brodi con indicatore di pH che, cambiando colore con la crescita batterica, permettono di validare un accorciamento importante del tempo di incubazione.

Indicatori biologici “self-contained” o autocontenenti (SCBI)

Una valida alternativa ai dischi è data dagli indicatori biologici “self-contained”, in cui un dischetto di acciaio con le spore è posizionato all’interno di una piccola provetta di plastica con tappo forato, assieme a un’ampollina di vetro contenente un brodo di coltura con indicatore di viraggio.

I vantaggi degli SCBI sono due: il tempo di incubazione post sterilizzazione si accorcia di molto e non vi è alcuna manipolazione delle spore dato che la strip rimane all’interno della provetta di plastica, dove viene incubata. L’indicatore deve essere posizionato all’interno del carico e sottoposto al ciclo di sterilizzazione, durante il quale il perossido di idrogeno entra in contatto con le spore. Al termine, si schiaccia la provetta rompendo l’ampollina interna, che quindi rilascia il brodo inumidendo il dischetto. Si procede con l’incubazione e la verifica dell’eventuale viraggio di colore.

Sospensioni di spore

Spore sospese in soluzione acquosa per esigenze particolari, ad esempio la verifica della sterilizzazione di medical devices sottili o dalla struttura complessa.

Si procede inoculando un’aliquota della sospensione sul campione e lasciando asciugare. L’oggetto deve essere poi impacchettato come di consueto e sottoposto a sterilizzazione. Al termine, l’oggetto va incubato in brodo di coltura per verificare l’eventuale crescita batterica.

Occorre considerare che il D-value indicato sul certificato si riferisce ai test eseguiti sulla sospensione inoculata su strip di carta e che la resistenza potrebbe cambiare in modo evidente a seconda del tipo di supporto su cui la sospensione è inoculata. Infatti, le spore possono aderire alle superfici formando addensamenti in zone che a livello microscopico risultano porose o rugose. Questo aspetto è ancora più evidente se si intende inoculare la sospensione in un liquido, i cui effetti sulla resistenza della spora possono essere del tutto inattesi.